捕获包被法检测抗体和捕获包被法检测抗体


捕获包被法检测抗体
 
捕获包被法(亦称反向间接法)elisa,首要用于血清中某种抗体亚型成分(如igm)的测定。以目前最常用的igm测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性igm和igg同时存在,则后者可搅扰igm的测定。因此先将一切血清igm(包括异性igm和非特异性igm)固定在固相上,在去除igg后再测定特异性igm。igm抗体的检测用于流行症的前期确诊中。先用抗人igm抗体包被固相,以捕获血清标本中的igm(其间包括针对抗原的特异性igm抗体和非特异性的igm)。然后参加抗原,此抗原仅与特异性igm相结合。继而加酶符号针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的igm成正相关。此法常用于病毒性感染的前期确诊。类风湿因子(rf)相同能搅扰捕获包被法测定igm抗体,导致假阳性反响。因此中和igg的间接法近来颇受喜爱,用这类试剂检测抗cmv iggm和抗弓形虫igm抗体已获成功。
  
捕获法测抗体的扼要操作过程:
  
1)特异性捕获抗体的包被,先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体外表;
  
2)参加待测样品,通过固定在载体外表的针对该抗原的抗体固定于载体外表;
  
3)参加特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体;
  
4)参加酶促反响底物,发作显色反响,显色的深浅与待测抗体的量成正比。
  
捕获包被法检测抗体
  
近年在亲和素-生物素体系上又发展出abs-elisa法 。亲和素是一种糖蛋白,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成,生物素为小分子化合物。用化学办法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶构成生物素符号产品,符号办法颇为简洁,并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素体系,简称abs(avidin-biotin system)。因为亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极端安稳,使bas符号技能比惯例酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技能有着更高的灵敏度,为微量抗原、抗体的检测拓荒了新的途径,大大提高了检测的灵敏度,但该办法比一般elisa多用了两种试剂,增加了操作过程,因此在临床查验中abs-elisa使用不多。abs-elisa法可分为酶符号亲和素-生物素(lab)法和桥联亲和素-生物素(abc)法两种类型。两者均以生物素符号的抗体(或抗原)代替原elisa体系中的酶标抗体(抗原)。
  
在lab法中,将特异性抗体生物素化、酶分子符号在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借bas的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反响即可检出抗原,因此提高检测的敏感度。
  
abc法相同将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上,亲和素和酶标生物素需要先按必定比例构成abc复合物,这种网络结构结合了很多的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱满时,生物素化抗体即可与之结合, 使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

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