亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing pcr，bsp）的dna甲基化检测方法具有较高可靠性及精确度，能精确得出片段中每一个cpg位点的甲基化状态。
实验原理
用亚硫酸氢盐处理基因组dna，未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。针对目标区域设计bsp引物进行pcr扩增，对扩增产物进行测序就可以判断哪些cpg位点发生了甲基化；一般将pcr产物克隆后进行测序成功率会比较高。
服务的流程
1. bsp引物设计：针对感兴趣的基因区域进行bsp引物的设计
2. 亚硫酸氢盐处理基因组dna：提取基因组dna并进行亚硫酸氢盐的转化
3. pcr扩增目的片段：bsp引物扩增感兴趣的区域
4. 克隆到载体：将pcr产物纯化后连接到载体上
5. 克隆测序：挑取阳性菌斑，提取质粒并测序（10个克隆）
6. 序列分析：对测序的结果进行比对和甲基化分析
项目周期
15-20个工作日
项目交付
1、提供完整实验报告
2、电泳图谱
3、测序图谱
4、序列比对图谱
5、分析数据
注意事项
1、客户提供：要调查的基因名称、种属，要调查的甲基化区域或位点；
2、样品要求：细胞≥105个；组织≥100mg；全血≥0.5ml；基因组dna ≥5ug；
3、所有样品建议干冰寄送，保持低温，保证样品质量；
4、每个检测片段序列长度不超过350bp。
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