荧光定量pcr仪是pcr仪中的一种,荧光定量pcr仪都可以检测哪些的项目呢?今天君意生物的小编就和大家一起来看看吧:
mrna定量
荧光定量pcr可以对基因的表达进行定量分析,可以通过外标准品定量的制备来实验基因表达的绝l对定量,也可以利用内参相对定量基因表达水平的变化。
mirna定量
micrornas (mirnas)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子rna,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链rna前体经过dicer酶加工后生成,不同于sirna(双链)但是和sirna密切相关。成熟的microrna是由21-25个核苷酸组成的小rna,长度太短,并不能通过传统的实时定量pcr进行检测,但是通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,配合实时定量pcr引物及探针可以精准检测微量样品中microrna表达水平。
定性分析
荧光定量pcr还可以用来检测单核苷酸多态性(snp)、点突变、等位基因以及dna甲l基化等。能够简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测,同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。
梯度pcr仪是pcr仪的一种,如今梯度pcr仪更多的应用于科研、教学机构。君意生物的小编就和大家一起来了解一下梯度pcr仪:
一次性pcr扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称之为梯度pcr仪。因为被扩增的不同的dnapian段其最适合的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性pcr扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知dna退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的pcr用。正真的梯度,是每一排管都有精准的加热控温探头,2009年为止只有美国abi公司可以做到。其他的都是从两头的热传递来设计控温。
如今市面上的pcr仪器有很多品牌,很多的种类,我们在选购pcr仪器的时候,需要如何来进行选购呢?下面就跟随君意生物的小编一起来了解一下吧:
如今的pcr仪器主要分为三大类:标准pcr(终点pcr)、实时定量pcr(qpcr)以及数字pcr(dpcr)。前两者大家都很熟悉,而后者是这两年冉冉升起的新星。
标准pcr仪主要是产生大量的核酸序列供后续实验使用,比如测序、克隆,或仅仅是为了在凝胶上看看有没有合适的条带。
qpcr则是实时定量靶序列,通常被用来测定生物分子的丰度,而不是生成终产物。“有了qpcr,研究人员就不再关心pcr产物发生了什么。他们的问题是:开始时有什么?突变是否存在?”罗氏的技术服务科学家joe donnenhoffer谈道。
数字pcr也是定量的,但并非实时。反应发生在大量的微小分区中。这些分区很小,其中每个可能包含0或1个dna分子。通过计算阳性反应的数量,研究人员能够真正定量dna。这比qpcr更为灵敏,也不需要标准曲线。
对于标准pcr仪和定量pcr仪之间的选择,研究人员通常都心里有数。不过,说到qpcr和dpcr之间的选择,研究人员就没那么有把握了,有时也需要帮助。据bio-rad的高级营销经理viresh patel介绍,这个选择通常取决于研究人员的应用和他们想要回答的问题。“当我们听到拷贝数分析或突变检测时,数字pcr通常能提供一个更好的答案,更明确的答案,”patel说。不过对于高通量应用,qpcr则更实际。
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