全自动dna测序法pcr仪
随着科学技术的发展,dna测序已从人工操作发展到用自动测序仪进行全自动测序,使得测序的准确度、样品序列判读长度和速度有了极大的提高
如今科研工作者只需准备好所需测序的样品,送至专业的测序用全自动dna测序仪(如 a 的型全自动dna测序仪)进行测序即可
本节简单介绍全自动dna测序仪的特点,不对全自动测序仪的具体操作步骤和注意事项等做详细介绍
一、组成
全自动测序仪一般由:电泳系统,激光检测装置,软件,计算机和打印机等几部分组成
二、优点
全自动测序仪采用种荧光染料标记核苷酸、在一个泳道测序的方法,有效地避免了因单一标记方法(如同位素标记)中个泳道电泳时所造成的迁移率不同对测序准确度的影响
由于可以采用两种荧光标记方法(标记ntp法和标记引物端法)、多种dna聚合酶和测序试剂盒,使得测序dna模板种类大大增加,如单链dna、双链dna和pcr产物等
全自动测序仪可以采用激光激发,使得代表不同碱基信息的不同颜色荧光先经过光栅分光,经ccd摄像机同步成像,一次扫描可以检出多种荧光,使得测序速度高达,一个样品一次可以测定余个碱基
在电泳技术方面,简化了灌胶技术,采用精确控温,提高了测序的精确度
应用多种软件,可以进行dna片段大小和定量分析、遗传基因的组型分析、dna亚克隆序列拼接、dna和蛋白质序列比较等
全自动测序仪可以使得一次测序样品数量大大增加,多达个样品,极大地提高了工作效率
现在国内有许多进行全自动测序,只需要将克隆的菌株交给,一般在~后即可得到结果,测序的长度在每个反应~左右
三、应用
pcr测序是对生物遗传信息的最终判定
随着各种基因组计划的开展,pcr测序工作在不断加强和完善,特别是全自动dna测序仪的开发,为提前完成人类基因组计划奠定了基础
此外,在临床遗传病、传染性疾病和癌症的基因诊断、农业畜牧业的动植物育种、法医鉴定等领域上有广泛的应用前景
过去由于全自动dna测序的仪器成本较高,手工的同位素标记的测序在国内曾经发挥过重要作用;但随着国内科研试验条件的改变,全自动dna测序仪已在国内广泛应用于序列的测定,但全自动dna测序仪广泛应用于突变的检测目前还受国内实验条件的限制