T4多聚核苷酸激酶

概述：
 t4多聚核苷酸激酶能够催化磷酸基团在atp的γ-位和寡核苷酸链 (双链或单链dna或rna)的5´-羟基末端以及3´-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有3´磷酸酶活性，将3´-磷酸基团从寡核苷酸的3´磷酸末端、脱氧3´-单磷酸核苷和脱氧3´-二磷酸核苷上水解掉。
 来源：
 重组e.coli菌株，克隆有t4多聚核苷酸激酶基因(1)。
 应用：
 1.dna或rna的5´末端磷酸化，以便进行连接反应。
2. dna或rna探针的末端标记，进行dna测序(2)。
3. 去除核苷酸等的3´磷酸基团(3)。
 反应条件：
 1× t4多聚核苷酸激酶反应体系含：1×t4多聚核苷酸激酶反应缓冲液 [70 mm tris-hcl (ph 7.6 @ 25°c)，10 mmmgcl2，5 mm dtt]，37°c温育。
 质量检测:
 核酸外切酶活性：50 μl反应体系中，300 u本酶与1μg的hind iii消化的λdna于37°c温育4小时，电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 μl反应体系中，200 u本酶与1μg的puc19质粒于37°c温育4小时，<10%的puc19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
rnase活性：50 μl反应体系中，100 u本酶与250ng的大肠杆菌rrna于37°c温育2小时，经琼脂糖电泳检测，被降解的rrna小于1%。
其他酶活性：50 µl反应体系中，50 u本酶在37°c条件下与5´羟基末端磷酸化的d(t)8反应，经biomolgreentm试剂显色后分光光度计检测，少于1%的产物被磷酸酶降解。
纯度：经sds-page (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
 质保声明：
 t4多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
 单位定义：
 1单位即1个richardson单位，指37°c条件下，30分钟内催化1nmol酸不溶性[32p]掺入所需要的酶量(1) 。
 参考文献:
 1. richardson, c.c. (1981).p.d. boyer (eds.), the enzymes, vol. 14, (pp. 299-314).san diego: academic press.
2. sambrook, j. et al. (1989). molecularcloning: a laboratory manual, (2nd ed.), (pp10.59-10.67, 11.31-11.33). cold spring harbor:   coldspring harbor laboratory press.
3. cameron, v. and uhlenbeck, o.c.(1977). biochemistry, 16, 5120-5126.
4. berkner, k.l. and folk, w.r. (1977) j. biol. chem.,252, 3176-3184.

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