PCR实验室设计、装修、建设工程SICOLAB

pcr实验室基本要求
pcr 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。只是使用实时荧光pcr仪、hiv病毒载量测定仪的pcr实验室,有上述前面三个区域即可。各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通。
标准的pcr实验室 产物分析区或三个区域的最后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。
pcr实验室各区域仪器设备配备通常如下:
标准的pcr实验室 试剂准备区:
仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。
标准的pcr实验室 标本制备区
仪器设备主要应有生物安全柜(最好为b2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果。此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。
标准的pcr实验室 扩增区
主要仪器就是核酸扩增热循环仪(pcr仪,实时荧光或普通的)。热循环仪的电源应专用,并配备一个稳压电源或ups,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等。
标准的pcr实验室 产物分析区:
本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、dna测序仪、酶标仪和洗板机等。
在理想情况下,pcr实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。
pcr实验室平面布置示意图
一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,
主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行
一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,
主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行
卫生部pcr研究员李金明(卫生部临床检验中心临床免疫室主任,研究员)的pcr建设方案再说吧!国外的资料不一定是最好。个人觉得李金明的实验室区正压(扩增分析区因为没有缓冲,所以为负压),缓冲间负压的作法可以更好的防止气体的外泄及防止试剂准备区、标本制备区、产物扩增区、扩增分析区四区之间的气体相互渗漏。pcr实验室也可以分为三个区,即第三、四区合为一区,必须设立缓冲间。有条件建设实验室采用三十万级的标准来建设。空调系统采用制冷剂各区独立循环,可以防止气流交叉。
疾病预防控制中心实验室建设之pcr 实验室基本要求:
1、 核酸扩增仪
2、 微量加样器(覆盖1-1000ul)
3、 可移动紫外灯(近工作台面)
4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
5、 专用工作服和工作鞋
6、 专用办公用品
(四)扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下:
1、 微量加样器(覆盖1-1000ul)
2、 可移动紫外灯(近工作台面)
3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)
4、 专用工作服和工作鞋
5、 专用办公用品
为了对以个特定序列进行pcr做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.
1、样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采 取预防措施:
1)pcr产物和带有要扩增序列的dna克隆不能在这个房间操作。
2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取dna或rna。
3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
4)dna样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。
5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。
6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。
7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和rna-pcr
rna-pcr的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在rna-pcr中应用ung以防止污染的方法也有报道。
3、前pcr区
必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前pcr区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前pcr区的正压活塞式移液管。
4、pcr实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(dnase和rnase)污染。
2)所有pcr试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前pcr区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前pcr区建立pcr混合物
1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的pcr成分。
3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和pcr前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。
4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在pcr产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。
5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。
6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、控制污染的方法
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用ung,这一技术能有效地消除由pcr产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。
7、pcr仪的位置
8、后pcr区
pcr完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后pcr活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前pcr活动。
pcr实验室又叫基因扩增实验室、临床pcr实验室、分子生物实验室等,sicolab专业为各生物制药、医学临床、医院检验科室行业提供专业严谨的实验室整体解决方案,资深设计师提供最佳实验室设计规划布局、实验室建设、装修方案,包括实验室系统改造,这里以通风系统为主,相关的涉及到实验室上下水系统、实验室配电及强弱电系统、实验室环保系统等,我们专业建设高端的实验室空间环境!